1D SDS-PAGE和IEF服務

百泰派克生物科技提供一站式蛋白質凝膠服務相關解決方案，包括SDS-PAGE、IEF和Native PAGE分析。

1D SDS-PAGE服務

聚丙烯醯胺凝膠電泳（PAGE）是分離大分子最常用的技術之一，包括DNA，RNA和蛋白質。電泳過程是透過施加電場作用使帶電離子進行遷移的過程。在該技術中，帶電分子的遷移率與其淨電荷和透過的溶液的電阻成正比。十二烷基硫酸鈉（SDS）是一種陰離子去汙劑，溶解過程中，其分子在較廣pH範圍內具有淨負電荷。多肽鏈與其相對分子質量成比例地結合一定數量的SDS，SDS上的負電荷破壞蛋白質的大多數複雜結構。







1D SDS-PAGE


將蛋白質混合物新增到凝膠上樣空中後，可能會出現最大的蛋白質還沒有遷移到凝膠上時，最小的蛋白質在已經跑出了凝膠的現象。因此爲了獲得更好的分離效果，利用凝膠的特性，將凝膠分為濃縮膠和分離膠兩層的方法能夠解決該問題。PAGE膠底部是較大的分離膠，頂部是較窄的濃縮膠。電泳緩衝液由甘氨酸製成，pH 8.3，濃縮膠的pH值為6.8，而分離凝膠的pH值為8.8。電泳期間，電流由帶負電荷的分子攜帶向同一個方向遷移。由於在pH 8.3時僅有約10％的甘氨酸分子帶負電荷，因此此處的電流主要由堆積緩衝液中的Cl-攜帶，Cl-離子趕在蛋白質之前朝堆積凝膠底部堆積。從而使得由SDS包裹的蛋白質分子被夾在位於上方的甘氨酸分子和下方的Cl-之間，並被濃縮成比最初載入的體積小得多的條帶。

隨著電流作用遷移，蛋白質遷移到分離膠中。此時，pH為8.8的分離凝膠緩衝液中的甘氨酸成為帶負電荷的分子，能夠非常快速的遷移，幾乎與Cl-離子保持一致，而蛋白質緊隨其後。此時蛋白質經由Cl-和甘氨酸陰離子的移動軌跡進入分離凝膠而攜帶電流。蛋白質變成一種具有類似流體動力學性質的桿狀帶負電荷高分子，其遷移率僅取決於其分子質量。

SDS-PAGE廣泛應用於蛋白質組學分析，包括蛋白質分子量測定，蛋白質鑑定，樣品純度分析，二硫鍵鑑定，蛋白質定量等。

等電聚焦IEF分析服務

等電聚焦（IEF）是一種基於蛋白質等電點（pI）分離蛋白質的一種電泳技術。當pI=pH時，蛋白質淨電荷為0，因此蛋白質不會在電場中遷移。在IEF中，蛋白質的分離是在含有兩性電解質混合物的聚丙烯醯胺或瓊脂糖凝膠中進行的，兩性電解質在電場中遷移並在凝膠中形成pH梯度。蛋白分子被集中在一個具有pH梯度的介質中，透過介質的電流將產生帶正電荷的氧化極和帶負電荷的還原極。帶電的蛋白質分子會向與其有相反電荷的一極運動，直到與周圍pH值與其等電點相同時帶電分子才停止在凝膠中運動，即蛋白質淨電荷為0時。

於是，具有相同等電點的蛋白質集中在pH固定的條帶中。每種蛋白質都位於pH梯度中與其pI相對應的位置。IEF技術具有極高的解析度，即使僅有一個電荷不同的蛋白質，也會被分到不同的條帶。







等電聚焦IEF分析