SDS-PAGE蛋白質純度分析:請問問問拍照條帶啊?怎麼觀看啊
SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)是一種常用的蛋白質分離和純度分析方法。在電泳完成後,需要對凝膠進行染色、脫色和拍照,以便觀察蛋白質條帶,以便分析蛋白的分子量大小和純度。大致的操作步驟如下:
1.染色:
將電泳完畢的SDS-PAGE凝膠轉移到含有染色液(如考馬斯亮藍)的容器中。根據染色液的型別,將凝膠在室溫下搖勻染色數小時或過夜。染色過程中,蛋白質會與染料結合,顯示出藍色條帶。
2.脫色:
將染色後的凝膠轉移到脫色液(如甲醇/醋酸/水混合溶液)中。將凝膠在室溫下搖勻脫色數小時,直至背景變透明,蛋白質條帶清晰可見。期間可以更換脫色液以提高效果。
3.拍照:
將脫色後的凝膠放置在透明膠片或玻璃板上,使用凝膠成像儀或普通相機進行拍照。確保拍照環境中的光線均勻,最好使用白色背景來突顯蛋白質條帶。可以使用攝像頭的白平衡功能來獲取最佳的成像效果。
4.結果分析:
將拍攝到的照片匯入影象分析軟體(如ImageJ),透過對比分子量標準(Marker)的條帶,可以估算目標蛋白質的分子量。觀察蛋白質條帶的清晰度、強度和數量來評估蛋白質的純度,如果一個泳道內只有一條清晰的蛋白條帶,說明該樣品蛋白純度較高;如果出現一個泳道出現多個條帶,則說明該樣品蛋白含有其他雜質蛋白。
透過上述觀察和分析,可以初步判斷蛋白質樣品在SDS-PAGE實驗中的純度。如果需要更精確的定量分析,可以考慮採用其他方法,如質譜分析。
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