質譜是怎麼做到定量的呢?
質譜(Mass Spectrometry,簡稱MS)是一種測量離子質量與質荷比(m/z)的分析技術。在質譜分析過程中,樣品中的分子被轉化為帶正電荷或負電荷的離子,然後透過質譜儀中的電磁場分離和檢測。質譜分析可以提供關於分子的質量、結構和組成的資訊。透過質譜技術,可以實現對樣品中各種成分的定性和定量分析。
質譜實現定量的原理主要是基於離子的訊號強度與其濃度之間的關係。在質譜分析中,每個離子的訊號強度(峰高或峰面積)與其在樣品中的濃度成正比。因此,透過比較目標離子的訊號強度與已知濃度的標準品離子訊號強度,可以實現對目標成分的定量分析。
常用的基於質譜的定量方法主要有:
1.標記法(Label):
透過在蛋白質樣本中引入穩定同位素標記,可以區分來自不同實驗條件或生物體的蛋白質。常見的標記方法包括同位素編碼的親和素標籤(Isotope-Coded Affinity Tags, ICAT)、細胞培養中氨基酸的穩定同位素標記(SILAC)、相對定量和絕對定量等壓標籤(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation, iTRAQ)以及串聯質量標籤(Tandem Mass Tag,TMT)等。
透過直接比較質譜圖中同一蛋白質的相對丰度來實現定量。這種方法不需要穩定同位素標記,適用於更廣泛的樣本型別。常見的標記-自由法包括基於離子計數(Ion counting)和基於特徵提取(Feature extraction)的方法。
3.靶向蛋白質組學(Targeted Proteomics):
透過選擇性反應監測(Selected Reaction Monitoring, SRM)、多反應監測(Multiple Reaction Monitoring, MRM)或平行反應監測( Parallel Reaction Monitoring,PRM)等方法,有針對性地測量特定蛋白質的丰度。這些方法通常具有較高的靈敏度和準確度,適用於驗證大規模蛋白質組學研究中的關鍵發現。
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