什麼是TMT?

TMT（Tandem Mass Tag）是一種用於蛋白質組學定量分析的同位素標記技術。它利用同位素標籤進行蛋白質組的相對或絕對定量，從而實現多樣本的同時比較和分析。TMT技術的核心是一系列同位素標籤試劑，這些試劑可以與蛋白質或肽段發生共價結合，形成可在質譜儀上檢測到的同位素標記產物。

一、TMT標籤由三部分組成：

1.可與肽段氨基酸（通常是賴氨酸）末端結合的活性基團；

2.可在質譜儀中解離出的平衡質量調節區；

3.含有不同同位素組成的唯一質量報告區。

二、TMT實驗的基本步驟如下：

1.蛋白質提取：

從不同樣本中提取蛋白質。

2.蛋白質酶解：

將提取的蛋白質進行酶解，通常使用胰蛋白酶，生成肽段。

3.肽段標記：

將每個樣本的肽段與不同的TMT標籤進行反應，形成標記肽段。

4.樣品混合：

將標記後的肽段混合在一起，形成一個混合樣品。

5.肽段分離：

使用液相色譜（如高效液相色譜，HPLC）對混合樣品中的肽段進行分離。

6.質譜分析：

將分離後的肽段進行質譜分析（通常是串聯質譜，MS/MS），在碎片離子的質譜圖中檢測到TMT標籤的報告離子。

7.數據處理：

透過比較不同TMT標籤的報告離子強度，計算蛋白質在不同樣本中的相對或絕對丰度。

三、TMT技術的優勢：

1.高靈敏度：

可以檢測低丰度的蛋白質；

2.分離能力強：

可以分離酸/鹼蛋白、小於10KD或大於200KD的蛋白、不溶性蛋白等；應用範圍廣：可以鑑定任何型別的蛋白質，包括膜蛋白質、核蛋白質和胞外蛋白質；

3.高通量：

可以同時分析10個樣品，特別適合對採用多種處理方法或多種處理時間的樣品進行差異蛋白質分析。

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基於TMT的蛋白質組學分析

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