大腸桿菌表達的蛋白，經鎳柱純化之後，除鹽，拿去打蛋白質質譜，為什麼會出現聚合物的訊號？
在大腸桿菌中表達蛋白並透過鎳柱純化後，蛋白質質譜中出現聚合物訊號的原因可能有以下幾點：
1.蛋白質本身易於聚合：
有些蛋白質在表達、純化或儲存過程中可能會自發地形成聚合物，如二聚體、三聚體等。這些聚合物可能是由於蛋白質結構的特性、氨基酸序列或疏水區域的相互作用導致的。
2.純化過程中蛋白質變性：
在純化過程中，蛋白質可能會受到變性劑、溫度、pH或其他因素的影響而部分變性。變性的蛋白質可能容易形成聚合物，從而導致質譜中出現聚合物訊號。
3.蛋白質樣品製備不當：
在質譜分析前的樣品製備過程中，可能存在操作不當的情況。例如，在濃縮蛋白時，如果過度濃縮，蛋白質可能會聚集。此外，緩衝液中的鹽濃度、pH值、溫度等條件也可能影響蛋白質的穩定性，從而導致聚合。
4.質譜分析過程中的聚合：
在質譜分析過程中，如ESI（電噴霧）或MALDI（基質輔助鐳射解吸/電離）等離子源可能會引發蛋白質的非特異性聚合。這些聚合物可能在質譜過程中產生訊號。
爲了減少蛋白質質譜中聚合物訊號的出現，可以嘗試採取以下措施：
1.改善純化條件：
最佳化蛋白質純化過程中的緩衝液成分、pH值和溫度等條件，確保蛋白質在整個過程中保持穩定。
2.新增穩定劑：
在蛋白質溶液中新增適當的穩定劑，如尿素、硫醇類還原劑、甘油、聚乙二醇等，以降低蛋白質聚合的可能性。
3.調整質譜分析引數：
最佳化質譜分析引數，例如離子源的電壓、溫度和氣體流速等，以降低非特異性聚合物的產生。
4.使用降低聚合物生成的樣品製備方法：
在製備質譜樣品時，應確保蛋白質在穩定的環境中。可以使用適當的溶劑、緩衝液和新增劑（如去氧膽酸鈉和面板蛋白酶抑制劑）以維持蛋白質的穩定性。同時，儘量避免在樣品製備過程中產生氣泡，因為氣泡可能導致蛋白質聚合。
5.使用質譜前的處理方法：
在進行質譜分析之前，可以嘗試使用過濾或凝膠過濾等方法，以去除樣品中的聚合物。這些方法有助於提高蛋白質質譜分析的準確性。
6.選擇適當的質譜分析方法：
根據蛋白質的性質和目的，選擇適當的質譜分析方法。例如，對於容易聚合的蛋白質，可以考慮使用脫氧膽酸鈉和面板蛋白酶抑制劑等新增劑進行二次離子質譜分析。
總之，爲了減少蛋白質質譜中聚合物訊號的出現，需要從多方面進行最佳化。包括改善純化條件、新增穩定劑、調整質譜分析引數、使用降低聚合物生成的樣品製備方法、質譜前的處理方法以及選擇適當的質譜分析方法。這樣可以提高蛋白質質譜分析的準確性和可靠性。
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