絕對定量的標準品如何製作？
絕對定量AQUA（Absolute QUAntification）方法是一種基於質譜的蛋白質定量技術，它透過使用同位素標記的合成肽段作為內部標準來實現蛋白質的準確定量。在絕對定量實驗中，標準品的製備至關重要，因為它為實驗提供了一個已知濃度的參考物質。以下是製備標準品的一般步驟：
1.選擇代表性肽段：
選定一個具有良好的可離子化效率、唯一性和較低化學修飾可能性的代表性肽段，以準確反映目標蛋白質的濃度。
2.合成同位素標記的肽段：
使用穩定同位素標記的氨基酸（例如13C或15N）合成所選代表性肽段。這種同位素標記肽段將作為內部標準。
3.肽段純化：
透過高效液相色譜（HPLC）或其他方法對合成的同位素標記肽段進行純化，以去除雜質。
4.定量：
使用氨基酸分析、紫外分光光度法等方法測量純化後的同位素標記肽段的濃度。
5.製備標準品：
將測得的同位素標記肽段與已知濃度的未標記肽段（或目標蛋白質）混合，以形成一系列不同濃度的標準品。這些標準品將用於質譜分析中的校準。
6.凍乾和儲存：
將製備好的標準品凍幹，以便長時間儲存。在實驗前，可以根據需要將其重新溶解。
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