wb條帶一高一低?
Western Blot(WB)免疫印跡是一種用於檢測特定蛋白質在樣品中的表達量的實驗方法。有時,在結果中可能會出現條帶一高一低的現象,這可能由多種原因導致,比如:
1.載體蛋白不均勻:
在樣品處理過程中,可能會出現蛋白質不均勻地沉積在凝膠上的情況。這可能是由於樣品未充分混勻,或者在樣品槽中填充時形成氣泡。
2.凝膠電泳問題:
在電泳過程中,可能出現凝膠不均勻、電壓設定不恰當或電泳時間過長/過短等問題,導致條帶一高一低。
3.轉膜過程:
在將蛋白質從凝膠轉移到膜上時,可能出現不均勻的轉移。這可能是由於轉膜設定不正確、轉膜時間不足或過長,以及轉膜緩衝液的組成不當等原因導致的。
4.阻斷劑不均勻:
如果阻斷劑沒有完全覆蓋PVDF或NC膜,可能會導致一部分膜上的非特異性結合位點未被阻斷,從而影響條帶的高度。
5.檢測抗體不均勻:
在孵育一抗和二抗時,如果抗體分佈不均勻或者未充分接觸到膜上的蛋白質,可能導致條帶一高一低的現象。
6.顯影不均勻:
在顯影過程中,可能會出現顯影劑分佈不均勻或顯影時間不適當的問題,導致條帶高度不一致。
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