菜鳥一枚想向液相大佬請教一下關於液相的問題?

在高效液相色譜法（HPLC）的梯度洗脫中，設定C流動相為純乙腈，D流動相為10%乙腈水溶液時，您還需要考慮以下幾個方面的設定：




1.梯度程式：

根據實際需求和目標化合物的性質，設定合適的梯度程式。梯度程式包括初始乙腈比例、乙腈比例變化範圍、梯度持續時間等。例如，可以從5%乙腈開始，逐漸增加到95%乙腈，整個過程持續30分鐘。




2.流速：

根據色譜柱的尺寸和需求，設定合適的流速。流速過高可能導致分離效果差，而流速過低可能導致分析時間過長。常用的流速範圍在0.2-2 mL/min之間。




3.柱溫：

設定合適的柱溫以最佳化分離效果。柱溫對於化合物在色譜柱上的保留和分離具有很大影響。常用的柱溫範圍為25-40°C，具體需要根據實驗需求和化合物的性質進行調整。




4.檢測波長：

根據目標化合物的最大吸收波長，選擇合適的檢測波長。這可以提高檢測靈敏度和準確性。如果目標化合物的最大吸收波長未知，可以嘗試使用多波長檢測或者全波長掃描。




5.樣品進樣量：

根據色譜柱的容量和檢測限制，設定合適的樣品進樣量。進樣量過大可能導致峰的拖尾或過載，而進樣量過小可能導致檢測不到目標化合物。




6.色譜柱：

選擇合適的色譜柱，如C18柱、C8柱等，以實現目標化合物的有效分離。色譜柱的選擇需要考慮化合物的極性、分子大小等因素。




梯度洗脫條件的設定需要綜合考慮目標化合物的性質、色譜柱的特點以及實驗需求。透過最佳化各項引數，可以實現有效的分離和準確的分析。




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