GST融合蛋白如何純化？
GST融合蛋白（Glutathione S-transferase fusion protein）是指將目標蛋白與GST蛋白透過基因工程手段連線在一起，以便於目標蛋白的表達和純化。GST融合蛋白純化利用了GST蛋白與谷胱甘肽（Glutathione，GSH）之間的特異性結合，透過谷胱甘肽親和層析法進行純化。
GST融合蛋白純化的主要步驟如下：
1.轉化表達載體：
將含有GST融合蛋白編碼基因的表達載體轉化至宿主細胞（如大腸桿菌）中。
2.誘導表達：
透過誘導劑（如IPTG）誘導宿主細胞中GST融合蛋白的表達。
3.細胞破碎：
收集經過誘導表達的宿主細胞，採用超聲、高壓斷裂或酶解等方法進行細胞破碎，釋放出含有GST融合蛋白的細胞裂解物。
4.裂解物處理：
透過離心等方法去除細胞殘渣和不溶性物質，得到清亮的細胞裂解物。
5.谷胱甘肽親和層析：
將細胞裂解物加入預平衡的谷胱甘肽親和層析柱（Glutathione Sepharose column），GST融合蛋白會與柱中的谷胱甘肽結合。之後，用平衡液洗脫非特異性結合的蛋白質。
6.洗脫GST融合蛋白：
使用含有較高濃度谷胱甘肽的洗脫液洗脫柱中的GST融合蛋白。這是因為洗脫液中的谷胱甘肽與柱中的谷胱甘肽競爭結合GST蛋白，從而使GST融合蛋白脫離柱子。
7.目標蛋白的回收：
若需要純化目標蛋白，可以透過特異性蛋白酶（如TEV蛋白酶或Thrombin）切割GST與目標蛋白之間的連線部位，釋放出目標蛋白。然後透過進一步的層析等方法去除GST蛋白。
8.蛋白純度檢測和濃縮：
透過SDS-PAGE、Western blot等方法檢測純化後的GST融合蛋白或目標蛋白的純度。如有需要，可以採用超濾、凝膠過濾或其他方法對蛋白進行濃縮。
9.蛋白質的儲存：
將純化得到的GST融合蛋白或目標蛋白儲存在適當的緩衝液中，並將其放入低溫（如-20°C或-80°C）環境中儲存。
GST融合蛋白純化主要透過谷胱甘肽親和層析法進行，其優點是方法相對簡單，特異性強，可以獲得較高純度的蛋白質。在實際操作過程中，需要注意各個步驟的細節以確保純化效果。
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