為什麼蛋白質測序以酸水解為主,鹼水解為輔?
蛋白質測序通常使用酸水解作為主要方法,鹼水解作為輔助方法,原因主要如下:
1.酸水解效率較高:
相比於鹼水解,酸水解能更有效地分解蛋白質,生成肽段,因此被廣泛採用。在酸性條件下,蛋白質中的肽鍵容易被切斷,從而生成相對易於分析的肽段。
2.酸水解對氨基酸損傷較小:
在鹼性條件下進行蛋白質水解時,部分氨基酸可能發生不可逆的化學改變,導致測序結果失真。例如,色氨酸容易在鹼性條件下降解,從而影響測序結果的準確性。相比之下,酸水解對氨基酸的損傷相對較小。
3.酸水解相容性較好:
酸水解方法在實驗操作和後續質譜分析中具有較好的相容性。酸水解產生的肽段可直接進行質譜分析,而鹼水解產生的肽段可能需要經過額外的處理步驟(如中和、去鹽)。
儘管酸水解是蛋白質測序的主要方法,但在某些特殊情況下,鹼水解可能作為補充方法使用。例如,當酸水解對某些氨基酸產生不利影響(如天冬氨酸和穀氨酸易在酸性條件下被水解),或者當需要獲取特定肽段或蛋白片段時,可以考慮使用鹼水解。
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