毛細管電泳純度分析(CE-SDS)的原理是什麼?所用的試劑都是什麼作用?
毛細管電泳純度分析(Capillary Electrophoresis, CE)是一種基於電泳原理的分離技術,透過在狹窄的毛細管中施加高電壓,根據分子在電場中的遷移速率進行分離。在CE-SDS(毛細管電泳-SDS-PAGE,Capillary Electrophoresis-Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)中,SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳技術被引入到毛細管電泳系統中,以實現對蛋白質樣品的分離和純度分析。
一、CE-SDS的原理包括以下幾個方面:
1.電泳分離:
在高電壓的作用下,不同電荷密度和大小的蛋白質分子在凝膠中以不同的速率遷移,從而實現分離。
2.SDS作用:
SDS(十二烷基硫酸鈉)是一種陰離子表面活性劑,用於蛋白質樣品處理。SDS與蛋白質發生結合,使蛋白質呈線性展開並帶有負電荷。這樣,蛋白質的遷移速率主要受分子大小影響,而不受原生電荷的影響。
3.聚丙烯醯胺凝膠:
聚丙烯醯胺凝膠作為毛細管電泳中的填充介質,對蛋白質分子的遷移起到篩選作用。分子量較小的蛋白質在凝膠孔隙中遷移較快,而分子量較大的蛋白質遷移較慢。
二、CE-SDS實驗中常用的試劑及其作用如下:
1.SDS(十二烷基硫酸鈉):
用於與蛋白質結合,使其帶負電荷,並使蛋白質呈線性狀態,便於電泳分離。
2.電泳緩衝液:
提供電解質環境,保持毛細管內外的電場均勻,同時影響蛋白質的遷移速率。
3.尿素:
可改變蛋白質-SDS複合物的遷移速率,提高分離效果。
4.沉澱劑(如乙醇、丙酮):
用於去除樣品中的雜質和低分子量成分,提高純度。
5.甲醇:
用於改變毛細管的電泳環境,降低蛋白質吸附。
6.染料(如染藍R250):
用於對蛋白質樣品進行染色,便於檢測。
CE-SDS是一種高效、高解析度的蛋白質分析技術。它結合了毛細管電泳的高解析度和SDS的蛋白質變性作用,使得不同大小和形狀的蛋白質能夠在短時間內實現有效分離。CE-SDS在生物技術、藥物研發、生物製藥等領域有著廣泛應用。
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