label free蛋白組學質譜的原理是什麼?
Label-free定量蛋白組學是一種基於質譜的蛋白質定量方法,不需要對蛋白質或肽段進行化學標記。與同位素標記方法(如iTRAQ、TMT和SILAC)相比,label-free方法具有操作簡便、成本較低、適用樣品範圍廣等優點。
Label-free蛋白組學質譜主要依據兩種定量策略:基於肽段強度的定量和基於肽段譜計數的定量。
1.基於肽段強度的定量(Intensity-based quantification):
在這種策略中,肽段的丰度透過其在質譜中的訊號強度(即離子強度)來估算。實驗中,透過對不同樣品進行液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)分析,比較相同肽段在不同樣品中的訊號強度,從而實現蛋白質定量。為提高定量準確性,通常需要對肽段強度進行歸一化處理,如總離子強度歸一化或內標歸一化等。
2.基於肽段譜計數的定量(Spectral counting-based quantification):
在這種策略中,肽段的丰度透過其在質譜中的譜計數(即匹配肽段的譜圖數量)來估算。實驗中,透過統計不同樣品中相同肽段的譜計數,實現蛋白質定量。譜計數定量方法需要對資料進行歸一化處理,如NSAF(Normalized Spectral Abundance Factor)等。
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