蛋白分析FAQ彙總
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蛋白質必須是凝膠條帶或凍乾的。PVDF 膜上的蛋白質不能透過質譜分析。斑點或條帶應染色(例如用考馬斯或質譜相容的銀染劑),然後切掉。凝膠片應在微量離心管中風乾,然後蛋白質相對穩定,可以透過郵政/快遞傳送。提供純淨的樣品並在低鹽緩衝液中,例如 50mM 碳酸氫銨;對於 TRIS 或磷酸鹽緩衝液
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1.蛋白樣品製備、純化、酶解;2.iTRAQ試劑標籤對產生的肽段進行差異標記;3.將標記的肽段混合在一起進行LC-MS/MS分析;4.質譜資料檢索分析定量肽段;5.透過多肽定量值迴歸到蛋白的定量值。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ,TMT, SILAC
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1.在一次實驗中,iTRAQ可以同時標記4至8個樣品。操作簡單快捷。適用於多個樣品的高通量檢測,並且實驗設計更加靈活;2.iTRAQ是在肽段水平上進行的體外標記,適用於許多型別的生物樣品;3.iTRAQ具有重複性好、靈敏度高的特點,可以同時進行定性和定量。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-
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iTRAQ技術的唯一缺陷可以說就是由於附近m/z同位素的干擾所導致的定量不準確。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ,TMT, SILAC
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首先應保證每個樣品的蛋白含量不低於50ug。其次,分析的樣品數量應在4-8個之間。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ,TMT, SILAC
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理論上任意來源的蛋白只要符合要求都可以進行iTRAQ定量,包括各種動植物、微生物、細菌和病毒蛋白等。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ,TMT, SILAC
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iTRAQ實驗一次可同時檢測8個樣品,一般可以鑑定到3000~5000個蛋白,具體需根據您的樣本而定。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ,TMT, SILAC
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iTRAQ標記定量利用標籤標記多肽,提高了肽段的離子化效率和可鑑定到的蛋白質數量,基於低分子量端進行定量提高了定量的準確性,且可同時檢測多達8種樣品;Lable free非標定量不受樣本條件限制,基於一級質譜資料對多肽進行定量,對質譜儀的重複性和穩定性要求挺高。iTRAQ在實驗週期以及準確度
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差異蛋白通常需要藉助差異倍數和P值兩個引數來確定,一般當兩種蛋白的差異倍數達到1.3-2倍且統計檢驗的P值小於0.05時即視為差異蛋白。相關服務:差異表達蛋白質統計分析
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Lable free非標記定量透過質譜檢測到的肽段離子峰強度以及質譜的分析次數來進行定量,肽段離子的丰度與其被質譜檢測到的次數成正比,透過兩者關係的數學公式將質譜計數與肽段含量聯絡起來而對肽段進行定量。相關服務:基於LABEL FREE的定量蛋白組分析
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